CCK8試劑盒的使用注意事項

　　CCK8試劑盒相較于早期的MTT方法，CCK8試劑盒因采用水溶性的WST-8試劑，避免了反復(fù)吹打或離心步驟對細胞層的物理干擾，同時消除了顆粒物散射導(dǎo)致的信號偏差，提升了檢測精度。整個實驗流程無需額外的裂解或洗滌步驟，加入試劑后可直接孵育并讀取結(jié)果，大大縮短了實驗周期。此外，該試劑盒支持高通量篩選模式，適用于大規(guī)模藥物測試和科研場景。
 

　　與傳統(tǒng)放射性同位素標記技術(shù)相比，CCK8摒棄了放射性物質(zhì)的使用，降低了生物安全隱患和廢棄物處理成本。其化學性質(zhì)穩(wěn)定且無毒副作用的特點也使其更適合長期動態(tài)監(jiān)測細胞狀態(tài)。從基礎(chǔ)研究到應(yīng)用開發(fā)均表現(xiàn)出色，包括但不僅限于藥物篩選、細胞毒性評估、腫瘤藥敏試驗以及生物因子活性分析等領(lǐng)域。
 

　　CCK8試劑盒的使用注意事項：
 

　　1.細胞狀態(tài)控制
 

　　-確保細胞健康且處于對數(shù)生長期，衰老或污染的細胞會導(dǎo)致脫氫酶活性下降，影響結(jié)果準確性。
 

　　-貼壁細胞需充分貼壁后再處理；懸浮細胞應(yīng)離心后重新懸浮，避免分布不均。
 

　　2.操作規(guī)范性
 

　　-避免氣泡：加樣時沿孔壁緩慢加入，減少氣泡生成(氣泡會散射光線，導(dǎo)致讀數(shù)偏差)。若有氣泡，可用無菌針頭刺破去除。
 

　　-防止污染：所有槍頭、耗材需滅菌處理，避免微生物污染影響細胞存活率。
 

　　-時間一致性：從加入CCK8到讀板的孵育時間必須嚴格統(tǒng)一(可設(shè)置定時器提醒)，因顯色速度與細胞代謝相關(guān)，時間差異會改變OD值。
 

　　3.干擾因素排除
 

　　-培養(yǎng)基成分干擾：含酚紅的培養(yǎng)基可能在450 nm附近有吸收峰，建議使用無酚紅培養(yǎng)基；血清濃度過高也可能影響透光率，需保持各孔血清比例一致。
 

　　-藥物顏色干擾：若待測藥物本身有色(如藍色、紫色)，需設(shè)置額外的“背景校正孔”(不加細胞僅加藥物+CCK8)，測定其本底吸光度并扣除。
 

　　-揮發(fā)風險：孵育過程中蓋緊板蓋，防止邊緣孔培養(yǎng)基蒸發(fā)導(dǎo)致濃度變化(可在周邊空孔中加水或PBS密封)。
 

　　4.試劑保存與使用
 

　　-CCK8試劑需避光保存于2~8℃(避免冷凍結(jié)冰)，使用前恢復(fù)至室溫并混勻(顛倒數(shù)次即可，不可劇烈震蕩)。
 

　　-避免反復(fù)凍融，分裝保存以提高穩(wěn)定性；過期試劑可能導(dǎo)致顯色效率降低或背景升高。
 

　　5.其他優(yōu)化建議
 

　　-預(yù)實驗必要性：初次使用時建議通過梯度時間和細胞密度測試確定檢測窗口期(如繪制生長曲線)，確保OD值落在儀器線性范圍內(nèi)(通常0.2~1.5之間)。
 

　　-復(fù)孔數(shù)量：每組至少設(shè)置5個復(fù)孔，減少隨機誤差；標準差過大時需檢查細胞是否均勻分布或操作是否存在失誤。
 

　　-對照完整性：必須包含空白孔(僅培養(yǎng)基+CCK8)、無細胞對照孔(驗證試劑自身是否有顏色變化)和未處理的正常細胞對照孔。