脂質體2000轉染法的經驗分享

　　1、轉染前1天將0.5～2×105細胞接種于24孔培養板，并加入500ul不含抗生素的*培養基，以保證轉染時細胞匯合達90～95%。

　　2、準備復合物

　　(1) 將0.8ug DNA稀釋于50ul無血清無抗生素的培養液中輕輕渾勻。

　　(2) 將2ul Lipofectamine2000稀釋于50ul無血清無抗生素的培養液中，輕輕渾勻，室溫孵育5分。注意：必須在25分內進行。

　　(3) 5分后將它們混合，并輕輕渾勻，室溫孵育20分。

　　3、吸去培養板的培養基，用PBS或無血清培養基()清洗細胞2次。

　　4、將復合物(總體積100ul)加入培養孔，前后搖動培養板使其分布均勻。

　　5、將細胞放入培養箱孵育4～6h后，可以更換含血清培養液去除復合物(也可不用)。

　　6、24～48h后可以觀察轉入基因表達情況。

　　7、穩定轉染：換含血清培養基24h后將細胞以1：10(或更高比例)傳代，1天后更換篩選培養基篩選。

　　8、優化：要保證細胞匯合率達90～95%(比較高);DNA/ Lipofectamine2000比率1：0.5～1：5，一般細胞1：2～3.

　　脂質體2000轉染法的主要優點是可用將DNA轉染至懸浮或者鐵壁細胞培養、轉染效率相對較高、對基因片段大小的限制較小等，但是

　　陽離子脂質體2000對細胞的毒性相對較高，為了防止其毒性，要摸索好如下實驗條件：脂質體2000與質粒的比例、細胞轉染時間等。