脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染法的原理說明

 　　脂質(zhì)體2000是陽離子脂質(zhì)體N-[1-2，3-Dioleyoxy， Propyl]-n， n，n-Trimethylammonium Chloride(DOTMA)和Dioleoyl photidye-thanolamine(DOPE)的混合物[1：1(w/w)]。它適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前條件下zui方便的轉(zhuǎn)染方法之一。轉(zhuǎn)染率高，優(yōu)于磷酸鈣法，比它高5~100倍，能把DNA和RNA轉(zhuǎn)染到各種細(xì)胞。

　　用LR進(jìn)行轉(zhuǎn)染時，首先需優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，應(yīng)找出該批LR對轉(zhuǎn)染某一特定細(xì)胞適合的用量、作用時間等，對每批LR都要做：*，先要固定一個DNA的量和DNA/LR混合物與細(xì)胞相互作用的時間，DNA可從1~5μg和孵育時間6小時開始，按這兩個參數(shù)繪出相應(yīng)LR需用量的曲線，再選用LR和DNA兩者*的劑量，確定出轉(zhuǎn)染時間(2~24小時)。因LR對細(xì)胞有一定的毒性，轉(zhuǎn)染時間以不超過24小時為宜。

　　細(xì)胞種類：COS-7、BHK、NIH3T3、Hela和Jurkat等任何一種細(xì)胞均可作為受體細(xì)胞。

　　脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染方法原理

　　脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染方法原理：脂質(zhì)體2000作為體內(nèi)和體外輸送載體的工具，已經(jīng)研究的十分廣泛，用合成的陽離子脂類包裹DNA，同樣可以通過融合而進(jìn)人細(xì)胞。使用脂質(zhì)體將DNA帶人不同類型的真核細(xì)胞，與其它方法相比，有較高的效率和較好的重復(fù)性。

　　中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)。帶正電的陽離子脂質(zhì)體，DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負(fù)電 的DNA自動結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上，形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物，從而吸附到帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面，經(jīng)過內(nèi)吞被導(dǎo)入細(xì)胞。