脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)材料及操作步驟

 

1、Vero細(xì)胞

 

2、轉(zhuǎn)染級(jí)質(zhì)粒

 

3、DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液：無(wú)血清DMEM、10%血清DMEM

 

4、脂質(zhì)體2000

 

5、6孔細(xì)胞培養(yǎng)板

 

二、脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作步驟：（以6孔板為例予以說(shuō)明）

 

1、細(xì)胞鋪板：轉(zhuǎn)染前一天進(jìn)行鋪板，第二天待細(xì)胞長(zhǎng)成單層即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染。（Vero細(xì)胞按一傳三的比例進(jìn)行傳代，一般10~12h即可。）

 

2、溶液1：240ul無(wú)血清DMEM+10ullipofectamine2000perwell（總體積250ul）（溫育5min）

 

3、溶液2：無(wú)血清DMEM+4ug質(zhì)粒perwell（總體積250ul）（根據(jù)質(zhì)粒濃度確定DMEM的體積，但保證總體積為250ul）

 

4、將溶液1與溶液2混合，室溫下置20min。

 

5、與此同時(shí)，將6孔板中的細(xì)胞用無(wú)血清DMEM沖洗細(xì)胞兩遍后，加入1.5ml無(wú)血清培養(yǎng)基。

 

6、將溶液1與溶液2的混合液逐滴加入孔中，搖動(dòng)培養(yǎng)板，輕輕混勻。在37℃、5％的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5~6小時(shí)。

 

7、6小時(shí)后，更換10%血清的DMEM，在37℃、5％的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48~72h檢測(cè)轉(zhuǎn)染水平。