小鼠胰腺腺泡癌細胞266-6的培養和鑒定方法

培養方法

培養基：使用DMEM培養基，并添加10%的胎牛血清（FBS）和1%的青霉素/鏈霉素（P/S）。

培養條件：細胞需要在含有95%空氣和5%二氧化碳（CO?）的孵箱中，于37℃進行培養。

傳代培養：266-6細胞易聚團，每次傳代均要保證胰酶消化充分，用含血清培養基終止消化，收集細胞后離心，收集細胞沉淀。細胞沉淀先使用3mL巴氏管輕柔吹打混勻，充分制備成單細胞懸液，再進行分瓶傳代。建議的傳代比例為1:2至1:3，每周進行23次傳代。每次傳代，均使用新的培養容器，培養容器二次使用易導致細胞聚團。

細胞復蘇：將含有細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入適量培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加適量培養基后吹勻，然后將細胞懸液加入培養瓶中培養過夜，第二天換液并檢查細胞密度。

細胞凍存：先將細胞消化并收集，離心后棄上清，加入凍存液，重懸細胞，并分裝到凍存管，凍存密度0.81.5×10?細胞/mL。將凍存管放入程序降溫盒，并放到80℃冰箱，過夜后將凍存管轉移到液氮保存。

鑒定方法

形態學鑒定：在倒置顯微鏡下觀察細胞形態，266-6細胞呈現上皮細胞樣的形態特性，多為多邊形或立方體形，貼壁生長。

分子生物學鑒定：可通過檢測細胞中特定基因的表達來鑒定，如檢測彈性蛋白酶I/新霉素轉基因的表達情況，因為266-6細胞帶有該轉基因。還可以檢測多種消化酶mRNA的表達，266-6細胞保留部分分化的表型，會表達可檢測水平的多種消化酶mRNA。

功能學鑒定：利用266-6細胞對某些物質有反應的特性進行鑒定，如該細胞對卡巴膽堿和縮膽囊素有反應，但對P物質、促胰液素或血管活性腸肽（VIP）沒有反應，可通過給予相應刺激物，觀察細胞的反應來輔助鑒定。